化學(xué)遺傳學(xué)和DREADD

大腦分分秒秒都在運(yùn)作，沒(méi)人想讓它停轉(zhuǎn)。但科學(xué)家要研究某個(gè)腦區(qū)的功能，就必須讓該腦區(qū)“停轉(zhuǎn)”。大腦行使功能依賴(lài)于億萬(wàn)神經(jīng)元的放電，停轉(zhuǎn)或失活一個(gè)腦區(qū)從微觀層面上來(lái)講，就是失活腦區(qū)內(nèi)的神經(jīng)元。

大腦功能依賴(lài)于神經(jīng)元

失活神經(jīng)元的方法大體可歸為兩類(lèi)：可逆和不可逆。如果一種手段只讓神經(jīng)元暫時(shí)失活，一段時(shí)間后又恢復(fù)正常功能，那么這種方法就是可逆的。反之，是不可逆的。

在可逆的技術(shù)中，有一種叫化學(xué)遺傳學(xué)。

化學(xué)遺傳學(xué)和DREADD

化學(xué)遺傳學(xué)是化學(xué)藥物和基因技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，泛指通過(guò)基因技術(shù)改變生物體蛋白質(zhì)，然后探索突變蛋白和化學(xué)藥物分子的相互作用。而DREADD是神經(jīng)科學(xué)家最常用的操縱神經(jīng)元反應(yīng)的化學(xué)遺傳學(xué)技術(shù)。

DREADD全稱(chēng)長(zhǎng)且拗口，卻清晰地表達(dá)了它的含義：人工設(shè)計(jì)的受體只被人工設(shè)計(jì)的藥物激活，Designer Receptor Exclusively Activated by Designer Drugs，英文簡(jiǎn)稱(chēng)DREADD。

具體來(lái)說(shuō)，人工設(shè)計(jì)一種蛋白受體，并通過(guò)病毒載體讓這種受體在神經(jīng)元內(nèi)表達(dá)，這種受體只專(zhuān)一地結(jié)合特定的人工設(shè)計(jì)的藥物，與之結(jié)合后可激活或抑制神經(jīng)元放電。藥物代謝完后，神經(jīng)元的功能又會(huì)恢復(fù)。

DREADD原理圖。左：內(nèi)源受體和配體，右：人工突變的受體和藥物

人工設(shè)計(jì)的藥物可以通過(guò)簡(jiǎn)單的方式攝入，比如肌肉、靜脈、腹腔或皮下注射，甚至口服。藥物進(jìn)入血液，穿過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦組織，最終跟人工設(shè)計(jì)的蛋白受體結(jié)合從而起作用。

化學(xué)遺傳學(xué)工作流程

有一種DREADD系統(tǒng)高頻出現(xiàn)在神經(jīng)科學(xué)研究中，它就是CNO-hM4Di/hM3Dq系統(tǒng)。

CNO-hM4Di/hM3Dq系統(tǒng)

CNO全稱(chēng)為氯氮平一氧化氮（clozapine N-oxide），是DREADD系統(tǒng)中人工設(shè)計(jì)的藥物。而hM4Di和hM3Dq是人工設(shè)計(jì)的蛋白受體，是經(jīng)過(guò)突變的人源毒蕈堿型受體。

毒蕈堿型受體是神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的內(nèi)源受體，廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)。毒蕈堿型受體是一種G蛋白偶聯(lián)受體，當(dāng)乙酰膽堿和毒蕈堿型受體結(jié)合時(shí)，受體被激活，構(gòu)象改變，進(jìn)一步激活偶聯(lián)的G蛋白，G蛋白再引發(fā)下游反應(yīng)，最終激活或者抑制神經(jīng)元。

毒蕈堿型受體是G蛋白藕連受體，M1，M3，M5型受體激活神經(jīng)元，M2，M4抑制神經(jīng)元

乙酰膽堿激活還是抑制神經(jīng)元?jiǎng)t取決于毒蕈堿型受體的具體亞型。如果是M4型毒蕈堿型受體，與之偶聯(lián)的是Gi蛋白，Gi蛋白的后續(xù)反應(yīng)最終會(huì)抑制神經(jīng)元。如果是M3型，招引來(lái)的則是Gq蛋白，Gq蛋白的下游反應(yīng)最終會(huì)激活神經(jīng)元。

為了能精準(zhǔn)地激活或抑制神經(jīng)元，人們將毒蕈堿型受體在特定位點(diǎn)進(jìn)行突變，突變后毒蕈堿型受體不再結(jié)合內(nèi)源的乙酰膽堿，而專(zhuān)一被人工藥物CNO激活，激活之后的下游反應(yīng)不變。

CNO

突變后的人源M4毒蕈堿型受體稱(chēng)為hM4Di，它跟CNO結(jié)合后會(huì)抑制神經(jīng)元。而突變后的M3毒蕈堿型受體稱(chēng)為hM3Dq，它跟CNO結(jié)合后會(huì)激活神經(jīng)元。

CNO和hM4Di結(jié)合使神經(jīng)元超極化抑制，和hM3Dq結(jié)合使神經(jīng)元放電

體內(nèi)機(jī)制

長(zhǎng)久以來(lái)，科學(xué)家認(rèn)為進(jìn)入體內(nèi)的CNO穿過(guò)血腦屏障作用于神經(jīng)元，但2017年的一篇《Science》文章改變了人們的看法。

CNO并不能穿過(guò)血腦屏障。

科學(xué)家將帶有放射性元素C11的CNO注射到老鼠體內(nèi)，然后用正電子發(fā)射斷層掃描技術(shù)（PET）來(lái)探測(cè)C11在體內(nèi)的位置。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠腦內(nèi)沒(méi)有一絲C11的星光，也就是說(shuō)帶有C11的CNO并沒(méi)有進(jìn)入大腦。

CNO并不能跨越血腦屏障（藍(lán)色中空位置是小鼠大腦）

進(jìn)一步，科學(xué)家犧牲掉小鼠，提取小鼠的血液、外周器官和大腦組織，然后檢測(cè)放射性同位素C11的蹤跡。跟PET檢測(cè)一樣，科學(xué)家只在血液和外周器官中發(fā)現(xiàn)C11，而腦內(nèi)一無(wú)所獲。

這就奇怪了。畢竟，一大摞已發(fā)表的文章表明，CNO和hM4Di/hM3Dq的結(jié)合可以有效的抑制或興奮腦內(nèi)的神經(jīng)元。

當(dāng)數(shù)據(jù)無(wú)法得到圓滿(mǎn)解釋時(shí)，科學(xué)家便開(kāi)始提出新的假說(shuō)。

CNO在生物體內(nèi)會(huì)轉(zhuǎn)化成氯氮平（Clozapine），那是不是氯氮平替CNO完成了使命了呢？

氯氮平（左）和CNO（右）

首先，科學(xué)家同樣將反射性同位素C11結(jié)合到氯氮平上，然后注射到小鼠體內(nèi)。當(dāng)PET掃描圖像呈現(xiàn)時(shí)，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)小鼠腦內(nèi)亮起了銀河。也就是說(shuō)，氯氮平可以穿過(guò)血腦屏障進(jìn)入大腦。

氯氮平可以穿過(guò)血腦屏障進(jìn)入大腦（黃色部分為小鼠大腦）

如果氯氮平想替CNO完成任務(wù)，它也必須能跟hM4Di和hM3Dq結(jié)合?？茖W(xué)家將hM4Di在小鼠腦內(nèi)某個(gè)特定位置表達(dá)。如果hM4Di對(duì)氯氮平有很強(qiáng)的親和力，那么hM4Di表達(dá)的位置也會(huì)是氯氮平聚集的位置。在氯氮平注射50分鐘后，PET技術(shù)和免疫化學(xué)染色均在hM4Di表達(dá)的位置點(diǎn)亮了聚集的氯氮平，這說(shuō)明氯氮平確實(shí)可以跟hM4Di高親和力的結(jié)合。

氯氮平Clozapine在hM4Di的位置聚集

最后一步要驗(yàn)證結(jié)合hM4Di的氯氮平能不能改變動(dòng)物的行為。首先，科學(xué)家將hM4Di表達(dá)在小鼠的伏隔核（nucleus accumbens），伏隔核是大腦獎(jiǎng)賞通路的一個(gè)重要成分，它接收多巴胺中樞VTA的輸入。以往的實(shí)驗(yàn)表明，如果抑制伏隔核，小鼠會(huì)變得蔫不拉幾，不愛(ài)動(dòng)。相反，激活伏隔核，小鼠超愛(ài)動(dòng)。

如果氯氮平能跟hM4Di結(jié)合并抑制伏隔核內(nèi)的神經(jīng)元，那么小鼠的運(yùn)動(dòng)量將會(huì)顯著減少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也正是如此。

少量的氯氮平（CLZ）即可抑制小鼠的運(yùn)動(dòng)

跟CNO相比，在小鼠身上達(dá)到同樣的行為效果，氯氮平只需要百分之一的量。并且，CNO被攝入體內(nèi)一段時(shí)間后才起作用，而這一延遲正是CNO在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成氯氮平所需的時(shí)間。

以上一系列實(shí)驗(yàn)表明，CNO在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成氯氮平，然后跟hM4Di結(jié)合，抑制神經(jīng)元反應(yīng)。

CNO和氯氮平的副作用

高濃度的CNO和氯氮平除了跟hM4Di、hM3Dq結(jié)合外，還會(huì)跟內(nèi)源性的配體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合內(nèi)源性的受體，從而產(chǎn)生副作用。這些內(nèi)源性受體包括多巴胺D1、D2受體、乙酰膽堿的毒蕈堿M1、M3、M4受體、五羥色胺2A受體等。而副作用在行為上表現(xiàn)通常為動(dòng)物精神不振、活動(dòng)減少。

既然CNO和氯氮平有副作用，那么有沒(méi)有更好的藥物可用呢？

去氯氯氮平（DCZ）

2019年，日本科學(xué)家Takafumi Minamimoto發(fā)現(xiàn)了另外一種藥物：去氯氯氮平（簡(jiǎn)稱(chēng)DCZ）。顧名思義，去掉氯氮平分子中的氯。

左：去氯氯氮平，右：氯氮平

去氯氯氮平和氯氮平結(jié)構(gòu)極其相似，和hM4Di、hM3Dq有更高的親和力。同時(shí)，跟內(nèi)源性多巴胺受體，乙酰膽堿受體和五羥色胺受體親和力較弱。也就是說(shuō)去氯氯氮平的選擇性更高，副作用也小，是新一代冉冉升起的明星藥物。

在猴腦內(nèi)，去氯氯氮平（DCZ）跟hM4Di的結(jié)合更特異

總結(jié)

化學(xué)遺傳學(xué)的方法對(duì)動(dòng)物損傷極小。病毒在腦內(nèi)表達(dá)后，每次實(shí)驗(yàn)只需肌肉或靜脈注射藥物即可抑制或興奮一個(gè)腦區(qū)，非常適合進(jìn)行人體醫(yī)學(xué)的轉(zhuǎn)化。

但化學(xué)遺傳學(xué)也有缺點(diǎn)，時(shí)間精度差。藥物會(huì)連續(xù)幾個(gè)小時(shí)起作用，在此期間，神經(jīng)元一直處于不正常狀態(tài)。大腦的認(rèn)知通常變化很快，幾秒內(nèi)甚至一秒內(nèi)會(huì)發(fā)生數(shù)個(gè)認(rèn)知過(guò)程，要分離開(kāi)這些瞬態(tài)且順序進(jìn)行的認(rèn)知過(guò)程，迫切需要更快速更靈活的可逆手段。

于是，光遺傳技術(shù)脫穎而出。